细胞分选在多种研究领域都有涉及，例如肿瘤学，神经生物学，免疫学等。上次和大家分享了磁珠分选，除了磁珠分选还有流式分选，今天小编在这里跟大家聊一下流式分选的原理、应用及与磁珠分选的区别，希望能帮到大家一二。

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流式细胞仪分选原理

流式细胞仪分选细胞有两种方法：一是“Catch Tuber"即“捕获管法"就是机械手臂以极快的速度出入样品液流，在细胞顺利获得激光照射并被确认之后快速捕获目标细胞至收集系统中，此种方法常用于小型台式机。另一种方法是电子偏转的方式，即将荧光染色确认的细胞标记正或负电荷，顺利获得电磁场偏转而分离，此种方法常用于大型科研型机器。

电子偏转示意图

操作流程

（1）先制备单细胞悬液（可检测多种样本的单细胞悬液：外周血、骨髓、细胞穿刺液、洗脱液、实体组织、培养细胞等）

（2）样本染色

①核酸标记：顺利获得核酸染料DAPI、PI等与核酸（DNA）结合，核酸含量越高，结合的染料越多，故可以顺利获得核酸染料的多少以及强弱进行细胞周期分选。

②蛋白标记：偶联荧光素的单克隆抗体与细胞表面/胞内的抗原结合，结合的量越多，荧光信号就越强。

③荧光报告蛋白：很多报告蛋白是荧光蛋白（GFP、DsRed等），可成为流式检测时荧光信号的来源。

（3）细胞分选

鞘液和样品流进入喷嘴后，在电磁传感器产生的高频振荡下，形成稳定的液滴，然后将荧光染色确认的细胞标记正或负电荷，顺利获得电偏转而分离。

（4）分选后细胞可进一步做分子生物学研究，如荧光定量PCR、western blot、细胞培养等。

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影响流式分选的因素

分选中304am永利集团一般都关心分选速度、分选纯度、分选得率、分选活性。

（1）如何提高分选速度：

振荡频率、鞘液压力、喷嘴大小、上样速度

-振荡频率越高，分选速度越快；

-振荡频率越高，鞘液压力也随之增加；

-若要形成稳定液滴，最佳振荡频率：f=V/（4.5d）；

-鞘液压力和喷嘴大小一定时，振荡频率相对固定。

-上样速度过快，得率会降低，故最佳上样速度=1/4*f

（2）如何提高分选纯度：

-精确设定液滴延迟时间（Drop Delay）：指细胞顺利获得激光检测区到液滴分离断电位置的间隔时间。

-保证液流稳定：鞘液和样品流进入喷嘴后，在电磁传感器产生的高频振荡下，形成稳定的液滴，即液流的断点位置维持在一个固定的位置。

-选择合适的分选模式

-排除样本粘连

-合理设门（用散点图）

-合理阈值设定

（3）如何提高分选得率：

- Drop Delay液滴延迟时间要准确，液流稳定

-如果不考虑纯度的情况下（不需后续培养），可以选择Enrich/yield分选模式

（4）如何提高分选活性

-与细胞本身的活性有关

-与仪器洁净程度有关

-与鞘液压力、喷嘴大小有关（对于脆弱细胞，尽量采用低压和大喷嘴，包裹细胞的液滴越大，对细胞的冲击越小）

-与上样管路设计及管壁光滑程度有关

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流式分选和磁珠分选的比较

总结：二者各有优势，不能相互取代。

磁珠分选的优势：

-操作简单、分选速度快、细胞活性好。

流式分选优势：

-多参数分选，不同荧光强度的分选。

二者相互结合，可用于分选比例较低的细胞群。例如要分选人的造血干细胞CD43+CD38-,可以先用磁珠分选富集CD34+细胞，再结合流式分选出CD34+CD38-造血干细胞。

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流式分选的应用

（1）流式分选在干细胞研究中的应用

2013年6月，上海中科院生化所李劲松组、神经所孙强组与健康所金颖组合作，建立来自食蟹猴孤雌囊胚的单倍体胚胎干细胞系，发表在Nature子刊Cell Research上，文中单倍体分选涉及到流式分选。

（2）流式分析在染色体分析分选中的应用

瑞士的一组研究人员建立起一套符合GMP标准的大规模体外扩增异体反应性NK细胞用于AML治疗的实验流程，采用经GMP认证的BD Influx分选出单一KIR（killer lmmunoglobulin-like Receptor）特异性的NK细胞，

（3）流式分析在荧光蛋白分选中的应用

将CFP基因插入到Abcg2基因得到基因改造小鼠，流式分选Abcg2/GFP+骨髓细胞，并移植入小鼠体内检测造血能力，发现：Lin-GFP+细胞显著富集造血干细胞，Lin-GFP-细胞无造血能力。

好了，今天小编给大家详细的介绍了流式分选的原理、应用及与磁珠分选的区别，希望对大家以后的实验有用。